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動物組織樣品的實時熒光定量PCR——北大醫學部推薦

利用百泰克公司2*SYBR real-time PCR premixture

進行動物組織樣品的實時熒光定量PCR
時間:2009年8月10日

在對不同動物組織樣品進行特定基因的mRNA水平檢測過程中,實時熒光定量PCR以其安全、快速、靈敏等特點在實驗中占據著絕對優勢。在使用此實驗手段之初,實驗室人員通常需要分別購買熒光染料以及酶體系等用于實時熒光定量PCR,通過人為配置復雜體系進行實驗。這種完全依靠人為手工配置的過程,對于極度靈敏的實時PCR而言是難以令人滿意的。實驗試劑質量的參差不齊和實驗人員的訓練水平都會影響實時定量PCR結果的準確性和重復性,有時甚至會導致實驗的失敗和珍貴樣品的浪費,因此使用商品化實時定量PCR的mixture逐漸成為趨勢。進口的實時定量PCR mixture大多價格昂貴,對于消耗量巨大的實驗室是難以負擔的,故國產的實時定量PCR mixture是實驗室的首選。
百泰克公司的2*SYBR real-time PCR premixture在我室目前進行的實驗研究中使用狀況良好,試劑質量穩定(我個人曾經最多反復凍融過4次,實驗效果也沒有受到影響),能夠快速地幫助實驗人員得到所需實驗結果。附圖為我室人員采用20ul體系進行實驗的結果,如圖1所示,使用百泰克2*SYBR real-time PCR premixture進行的實時定量PCR溶解曲線良好,背景干凈,產物單一特異;如圖2、3所示,使用百泰克2*SYBR real-time PCR premixture進行的實時定量PCR得到的擴增曲線平滑,背景低,起峰時間正常;如圖4所示,為實驗后得到的結果統計。
此外,良好的實時結果亦取決于RNA質量。百泰克公司的離心柱型總RNA提取試劑盒對于動物組織樣品的RNA提取效果良好、性價比較高,是值得推薦的。如圖5所示,對于腎臟和肝臟這樣的組織,百泰克公司的RNApure高純總RNA快速提取試劑盒(離心柱型)(貨號:RP1201或RP1202)與invitrogen公司的TRIzol試劑提取有類似的效果,但對于胰腺這樣極其容易發生自溶,并且RNA又極易降解的組織,百泰克公司的離心柱型總RNA提取試劑盒提取的樣品幾乎沒有降解,具有極大的優勢。
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圖1:百泰克公司2*SYBR real-time PCR premixture所得溶解曲線

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圖2:百泰克公司2*SYBR real-time PCR premixture所得擴增曲線
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圖3:百泰克公司2*SYBR real-time PCR premixture所得擴增曲線(Y軸放大)

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圖4:百泰克公司2*SYBR real-time PCR premixture所得結果統計

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     百泰克 TRIzol              百泰克 TRIzol         百泰克TRIzol 
        Pancreas                        Kidney                       Liver

圖5: 動物不同組織RNA提取的試劑比較

 

 

北京大學醫學部生理系 孔曉牧

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