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植物材料直接PCR技術
 
高通量植物(轉)基因檢測的利器---植物材料直接PCR技術

摘要: 北京百泰克生物技術有限公司暨推出通用植物總RNA提取試劑盒(RP3301)成功解決了各種難提植物RNA的問題后,新近又針對高通量植物DNA的提取擴增推出了最新產品——植物直接PCR試劑盒(PR7501),該試劑盒不需要液氮和研磨杵研磨,也不需要鋼珠破碎,更不借助任何特殊的儀器設備,方法及其方便快捷。

眾所周知,在正向遺傳學的基因定位,植物品質和品種鑒定,或者是植物有效成分檢測,以及轉基因檢測等,都需要高通量植物的DNA提取,然后PCR檢測。尤其是在基因圖位克隆中,需要構建一個大的群體(少則幾千株,多則上萬株),然后提取DNA,PCR方法篩選性狀的連鎖標記(SSR,RAPD等),最后測序克隆基因。傳統方法在DNA提取中,都要液氮研磨樣品,然后氯仿抽提,最后再PCR。上千株系DNA的提取就需要幾周的時間。一些公司進行改進,開發了相對簡單些的方法,用96孔吸附板進行提取,完成整個實驗也需要大約1個小時;也有些公司在96孔深孔板中加入鋼珠或者其他比重大的金屬小珠幫助破碎,直接裂解后取上清做PCR,能將時間縮短至半小時,但是需要借助專用的震蕩器,而且鋼珠的使用成本很高;也有的公司不借助鋼珠,而提供小的研磨杵,在PCR管人工研磨后裂解取上清進行PCR,顯然耗費的人工時間比較多,而且也容易相互污染。

以上的方法對于大規模的基因或轉基因檢測顯然不理想,不僅時間長而且易污染!國內外很多知名的公司紛紛投入到改進新技術的研發中!北京百泰克生物技術有限公司暨推出通用植物總RNA提取試劑盒(RP3301)成功解決了各種難提植物RNA的問題后,新近又針對高通量植物DNA的提取擴增推出了最新產品——植物直接PCR試劑盒(PR7501),該試劑盒不需要液氮和研磨杵研磨,也不需要鋼珠破碎,更不借助任何特殊的儀器設備,方法及其方便快捷。只需截取0.5-0.7厘米的植物葉片放入溶液L中,95℃孵浴10分鐘,無需液氮研磨,然后加等體積溶液I,就可以直接進行PCR,方便快捷,是植物領域的科研工作者的最佳選擇之一。植物直接PCR試劑盒的特點有:
* 在12 分鐘內可以一步提取植物基因組DNA。
* 不需要酚/氯仿抽提。
* 不需要液氮對植物組織進行冰凍、機械處理、純化或者DNA 的沉淀。
* 含PCR MIX,裂解后取4ul就可以直接PCR。
* 不需要上樣緩沖液和染料。
* 提取物在4℃可以保存6周。

實例1:
1、截取1-2片0.5-0.7厘米的水稻葉片放入1.5ml 離心管中,加入100μl溶液L,確保葉片浸沒在溶液中。 
2、95℃孵育10 分鐘,此時DNA已釋放但葉片并沒有明顯的消化。
3、加入100μl溶液I。Vortex混合。直接PCR。 
4、PCR反應體系配制:
PCR體系 體積
抽提物 4μl
2×PCR MIX 10μl
上游引物 1μl
下游引物 1μl
水 4 μl
總體積 20μl

5、在PCR儀上進行如下反應:
94℃ 3min
94℃ 0.5-1min
50-65 C 0.5-1min 30-35個循環
72°C 0.5-2min
72°C 10 min
6、8%聚丙烯酰胺膠電泳,銀染。
1

實例2:
提取、PCR同實例1。檢測用2%的瓊脂糖。
2

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